本发明涉及一种干细胞无血清培养基，包括基础培养基，胰岛素、谷氨酰胺、含铁的食品添加剂、亚硒酸钠、孕酮和丁二胺。同时，本发明还公开了一种干细胞的培养方法，包括如下步骤：获取干细胞，采用本发明提供的干细胞无血清培养基进行体外培养。通过本发明提供的干细胞无血清培养基所获得的细胞，不仅可避免血清培养基所携带的病原体污染造成纯化细胞困难的问题，而且能够提高细胞生产的稳定性、提高细胞增殖量，以及增强细胞活性。