本发明公开一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法，所述干细胞培养基中不含血清，所述干细胞培养基包括氨基酸、维生素、盐类、脂类、细胞因子和蛋白多肽。所述干细胞培养基适合于快速培养人及哺乳动物组织来源的干细胞，包括但不局限于脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞和脐带血干细胞。该培养基能让细胞的扩增速度提高3-5倍，但又不影响其分化的潜能。采用该干细胞培养基与普通培养基相比，不仅能更快速扩增不同来源的干细胞，延长了传代次数，而且又能很好的保持干细胞的潜能性。