本发明涉及多肽药物制备领域，尤其涉及一种普利卡那肽的制备方法。该方法包括：固相合成Fmoc-Leu-树脂；按照普利卡那肽的肽序，在Fmoc-Leu-树脂上依次偶联-Cys¹⁵、-Gly、-Thr、-Cys¹²、-Ala、-Val、-Asn、-Val、-Cys⁷、-Leu、-Glu、-Cys⁴、-Glu、-Asp、-Asn，制得普利卡那肽线性肽树脂，经裂解制得普利卡那肽线性粗肽；取普利卡那肽线性粗肽，经第一环化、第二环化，即得。该方法采用tBu或Acm作为半胱氨酸的侧链保护基，并通过两步环化，得到了纯度以及收率都很高、二硫键准确定位的产物，且反应条件温和，利于工业化生产。