本发明提供一种抗菌肽及其制备方法和应用，所述抗菌肽包含下述SEQ？ID？NO:1所示的氨基酸序列：SEQ？ID？NO:1：GFGC₄PFNENEC₁₁HAH？C₁₅LSIGRKFGFC₂₅AGPLRATC₃₃TC₃₅GKQ，所述氨基酸序列中的6个半胱氨酸经氧化形成三对分子间二硫键，所述三对分子间二硫键分别为第4、25位半胱氨酸、第11、33位半胱氨酸和第15、35位半胱氨酸间形成的分子间二硫键；所述抗菌肽用于抗细菌，成为研发抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和铜绿假单孢杆菌的多肽类药物先导。