本发明属于生物技术领域，具体涉及一种可溶性重组胰岛素及其衍生物的表达方法及其应用。该表达方法利用重组DNA技术以Trx替代重组胰岛素及其衍生物A、B链之间的C肽、从而有效改善可溶性重组胰岛素及其衍生物的基因工程表达产量。该表达方法与低温表达、多分子伴侣共表达联合应用时，能够显著提高可溶性重组胰岛素及其衍生物的产量。本发明还提供了一种可溶性重组胰岛素及其衍生物的纯化制备方法及其在制备治疗糖尿病药物中的应用。