本发明涉及甾体类药物中间体的生产方法，具体来说是用微生物发酵转化甾醇制备去氢表雄酮的方法，包括如下步骤：（1）将甾醇的3位羟基进行保护的步骤，得保护物；（2）将保护物用菌株Mycobacteriumsp.NRRLB-3683或3805进行发酵的步骤；（3）将目的物进行水解的步骤；（4）提纯的步骤；本发明提供了一种从植物甾醇制备去氢表雄酮的新的路径，极大的降低了去氢表雄酮的生产成本，提高了去氢表雄酮的质量收率。