本发明公开了一种(2-(2-氧基-4-硫代嘧啶)乙氧基)甲基膦酸酯类衍生物及其制备与应用。该衍生物具有通式I所示的结构：其中，R₁为氢、甲基，烯丙基，炔丙基或苄基；R₂为氢、乙基、特戊酸甲基、异丙氧基羰基氧甲基或苄氧基羰基氧甲基；本发明还提供该衍生物的制备方法及应用。本发明的衍生物具有较高的抑制HBV活性，可作为先导化合物用于抗HBV药物的制备。