本发明公开了一种土霉素脂质体的制备方法，包括以下步骤：1）配制浓度为3mg/ml的土霉素药液；2）取磷脂和胆固醇加入无水乙醇中，水浴搅拌溶解并挥散乙醇，成膜后加入柠檬酸缓冲液，水浴搅拌充分水化后经微孔滤膜过滤整粒，得空白脂质体；3）主动载药：依次取空白脂质体、土霉素药液、NaHCO₃溶液，混合振荡摇匀，水浴保温后用冷水降温，制得脂质体粗品；4）将步骤3）所得粗品进行低温高速离心处理，制得土霉素脂质体。本发明制备的土霉素脂质体包封率高，临床效果好，延长了该药物的有效作用时间，提高生物利用度，延长半衰期，增加了药物的稳定性，该方法简单易行，可操作性强，可在临床上广泛应用。