3-乙酰基-5-乙酰亚氨基-2-（N-吩噻嗪基）-1,3,4-噻二唑及其制备方法和应用，本发明以N-甲酰吩噻嗪缩氨基硫脲Schiff碱和乙酸为原料，二氧化锰为催化剂，在90～110℃下搅拌反应，待反应所得的混合液冷却至室温，然后除去二氧化锰，得到的滤液浓缩至干，即得3-乙酰基-5-乙酰亚氨基-2-（N-吩噻嗪基）-1,3,4-噻二唑。该制备方法操作步骤简单，后处理简单方便，且不会产生二次污染，产率高，符合工业生产的需要。同时，该化合物可以抑制革兰氏菌的生长，具有一定的生理活性，能够作为抗革兰氏菌药物或在制备抗革兰氏菌药物中的应用，有望应用于医药、农药等领域。