本发明涉及用于荧光原位杂交检测粪肠球菌和/或其他肠球菌快速检测的肽核酸探针，该探针的DNA序列如SEQ NO：1、SEQ NO：2所示。本发明还公开了应用该探针鉴定样品中粪肠球菌和/或其他肠球菌及其药物敏感性的试剂盒及其使用方法。本发明的探针和试剂盒可用于检测样品中粪肠球菌和/或其他肠球菌菌株及其药物敏感性。本发明省去DNA提取步骤，一般整个鉴定过程耗时不超过2个小时；且假阳性低，步骤少，效率高、敏感度高、特异性强。本发明能够迅速准确地检测粪肠球菌和其他肠球菌，对于保障食品安全、保证环境卫生、预防疾病传播具有重要意义。