本发明提供三个异香豆素类新抗生素和田霉素（Hetiamacin）B、C、D及其制备方法以及和田霉素B、C、D及其组合物在制备抗生素药物中的应用。上述化合物左侧都具有所有Amicoumacin类化合物的骨架结构：甲基丁基氨基-3,4-二氢-8-羟基异香豆素；右侧侧链上10′-C、11′-C、12′-C、14′-C与13′-NH、15′-NH相连，形成一个六氢嘧啶环结构。上述化合物通过对枯草芽孢杆菌菌株的发酵并分离而得，对革兰氏阳性细菌如葡萄球菌属及其耐药菌等具有很高的抑制活性，有望成为抗革兰氏阳性菌药物及其先导化合物而具有良好的药用开发前景。