本发明提供了一种含5种喹诺酮类残留的鳗鱼糜自然基体标准样品的制备方法，是将体内不含喹诺酮类药物残留的鳗鱼经5种药物同时药浴7h后捕捞，获得含5种喹诺酮类残留的阳性鳗鱼，将阳性鳗鱼冷冻处死，经处理得到鳗鱼糜均匀阳性材料，分装、辐照灭菌后，经均匀性检验、稳定性检验、协同定值，得到含5种喹诺酮类残留的鳗鱼糜自然基体标准样品，其所含喹诺酮类残留量范围为5μg/kg~30μg/kg。本发明制备的多残留鳗鱼糜自然基体标准样品外在形态及内在目标物结合情形都与真实检测样品完全一致，避免了冻干粉和加料基体标准样品的缺陷，产品均匀稳定，使用可靠，可在常温下传递，适用于水产品中相关药物残留检测分析的质量控制。