本发明公开了合欢皮抗肿瘤有效部位提取物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。合欢皮抗肿瘤有效部位提取物是通过合欢皮水提醇沉，先后用乙酸乙酯、水饱和的正丁醇萃取，正丁醇提取物硅胶柱分离，其中二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱部位得到的合欢皮抗肿瘤有效部位提取物，它具有明显的抑制U251（胶质瘤细胞）的作用，可以用于制备抗肿瘤药物。