本发明公开了一种靶向EPS8与EGFR结合的短肽及其应用，所述短肽的序列为：N’-Arg-Lys-Lys-Asn-Lys-Pro-Pro-Pro-Pro-Lys-Lys-C’。所述短肽能够有效抑制EPS8阳性肿瘤的增殖，能够用于制备治疗EPS8阳性肿瘤的药物，具有开发为抗肿瘤肽类药物的巨大潜力。