本发明马尾松组培苗瓶外生根方法，取带0.5cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体在培养基Ⅰ中诱导丛芽；将诱导丛芽在培养基Ⅱ中伸长培养，单个切下顶芽接种到培养基Ⅲ中增殖获得继代芽Ⅰ；将继代芽Ⅰ重复伸长，单个切下继代芽Ⅰ并分成顶芽和芽段后在继代增殖培养基Ⅲ中继续增殖获得继代芽Ⅱ，将继代芽Ⅱ再重复伸长与增殖获得新的增殖继代芽；将单个切下高2.5-3.5cm的继代芽移植育苗杯中瓶外生根，然后移栽苗圃培育获得组培瓶外生根苗。本方法简化试管苗生产程序，降低生产成本，提高生产效率，生根处理25-30d，瓶外生根率达92-98%，且根系质量较高，移栽成活率达90-95%，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。