本发明公开了一种雨城丹桂愈伤组织分化及增殖方法，包括：1）从健康茁壮的雨城丹桂树上，选取盛花期时的新鲜花梗，进行消毒处理；2）无菌条件下，将处理后的材料接种于诱导及分化培养基上，温度25±1℃，全黑暗条件下，培养至分化；其中，诱导及分化培养基为：B5+6-BA2.0~3.0mg/L+2,4-D0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，pH5.5；3）将已分化的愈伤组织接种于增殖培养基中，温度25±1℃，光照时间为12h/天，光照强度为2500lx，25天继代增殖一次，即可；其中，增殖培养基为：B5+6-BA3.0mg/L+NAA0.10mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，pH5.5。本发明以花梗为外植体进行愈伤组织的分化及增殖培养，先经过30天的诱导培养，愈伤组织的分化率较高，达到90%；然后经过25天的继代增殖培养，愈伤组织的增殖系数较高，可以达到1.8，具有很好的实用性。