本发明提供了一种基于脂肪酸去饱和酶基因的抗寒转基因烟草的构建方法，首先，利用RT-PCR法扩增出了菠菜的硬脂酰基载体蛋白去饱和酶基因(SAD)，连接该基因至植物遗传转化载体pBI121上；经核苷酸序列分析克隆并重组正确的载体转化至农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404中；含重组质粒的农杆菌以叶盘法转化烟草无菌苗外植体，筛选出卡那霉素抗性植株并移栽于花盆中，生长成熟后收集种子；种子播种于含卡那霉素的MS培养基上使其萌发生长；从卡那霉素抗性植株的叶片提取核DNA进行PCR检测、点杂交及Southern杂交鉴定；最后，以分子鉴定的阳性转基因烟草作为实验材料，在低温胁迫下，分别进行电导率测定和叶绿素含量测定，转SAD基因烟草的抗寒性有明显的改善。