本发明公开了一种双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法。本发明以双片苣苔叶片为外植体，通过筛选和优化初代诱导、继代增殖、生根和移栽培养基配方和培养条件，经过不定芽的初代诱导、继代增殖和生根培养以及试管苗的移栽阶段，实现珍稀观赏植物双片苣苔种苗的快速繁殖，一般只需110天就可以获得双片苣苔的幼苗，并且双片苣苔幼苗的成活率可达95%以上。因此本发明具有简单、快速和有效的特点，可以直接用于双片苣苔的繁育和保护，从而为该物种的遗传改良、种质资源保护和开发利用奠定基础。