本发明公开了一种铁皮石斛试管开花及结实的方法，该方法包括以下步骤：采用铁皮石斛茎段或蒴果作为外植体进行诱导培养，再经原球茎增殖培养、原球茎生根培养、生根苗诱导开花培养及授粉过程及结实培养后，形成试管花及试管果实；该方法可以准确有效地调控铁皮石斛试管开花率；并且，本发明采用在无菌环境中授粉及授粉后采用专用培养基进行结实培养，提高其结实率；所结果实的果夹直径可达0.8～1cm，授粉结实率高达90%。