本发明公开了一种彩色粗肋草吉祥组织培养方法。步骤为，选取健壮无病虫害彩色粗肋草吉祥停止浇水几天后取样；用添加洗衣粉的水溶液进行漂洗，后用流水冲洗，分段后再用75％乙醇处理30秒，1‰的HgCl₂进行消毒20分，无菌水冲洗；接种消毒好的无菌体培养，光照时长8h/d，获得外植体；用刀尖侧刺生长点，进行培养，光照时长8h/d；将抽高的芽高大于15mm的芽以单芽形式切下，接入生根培养基中培养，光照时长12h/d；所述培养条件为光强1500-2500lx，温度26±1℃，培养周期5-6周；移栽。采用本发明的方法，增殖率提升到4.0，生根率提升到95%以上，种植成活率在90%以上。