本发明公开了一种利用黄花牛耳朵叶片快速繁殖其种苗的方法，通过对其外植体进行初代培养、继代培养和炼苗移栽，经“初代培养→继代培养”两步法直接成苗，可在90天左右繁殖获得大量健壮小苗，无需经过生根阶段，而且继代培养不需添加激素，不仅减少了生产环节，而且降低了生产成本，实现黄花牛耳朵有效繁殖。本方法不仅取材方便，不会影响黄花牛耳朵野生种群的数量；而且操作简单、生产成本低、稳定高效，能大大缩短育苗周期，将为其保护和开发利用提供技术保障。