本发明公开了一种光萼唇柱苣苔组织培养及快速繁殖的方法。本发明以光萼唇柱苣苔叶片为外植体，通过筛选和优化初代诱导、继代增殖、生根和移栽培养基配方和培养条件，经过不定芽的初代诱导、继代增殖和生根培养以及试管苗的移栽阶段，实现光萼唇柱苣苔种苗的快速繁殖，一般只需80天就可以获得光萼唇柱苣苔的幼苗，并且光萼唇柱苣苔幼苗的成活率可达95%以上，从而为该物种的遗传改良、种质资源保护和开发利用奠定基础。