本发明公开了一种大丽花组培繁殖的种质保存方法，包括以下技术环节：1）外植体的选材与低温预处理；2）接种；3）不定芽诱导并转接；4）慢生长保存种质；5）复壮；6）生根移栽。本发明提供的大丽花组培繁殖的种质保存方法对大丽花种质保存周期长达4年，同时还解决了种质保存占地面积大、费用高等问题，而且操作简便，技术稳定可靠，可重复性强，非常适合大规模大丽花种质的保存，是一种优良的大丽花种质资源保存方法。