本发明公开了一种沾化冬枣叶片愈伤组织的培养方法。选择沾化冬枣20天叶龄，取自叶基部向上第3-4叶作为外植体，消毒后，接种于诱导培养基上，然后置于温度28±1℃，暗培养或弱光培养，得到冬枣叶片愈伤组织；所述的诱导培养基，每升含有TDZ？1～1.5mg、麦芽糖20g、琼脂10g，余量为3/4MS培养基，pH5.8。按照本发明的方法能够高效的获得沾化冬枣叶片愈伤组织，其出愈率高达85％以上，并且无褐变和玻璃化等问题，从而为获得组培苗，实现优良株系的无性快繁，建立一个高效稳定的叶片再生体系，同时也为基因工程操作提供优良的实验材料和遗传转化体系的建立奠定基础。