本发明涉及一种北美红杉离体生根培养方法，首先选取当年生的北美红杉枝条为材料，经过消毒、清洗后于MS培养基上长成无菌苗，然后将顶芽或腋芽作为外植体于增殖培养基中进行增殖培养，将增殖后的无菌苗进行生根培养，生根培养基为1/4MS+0.1～1.0mg/L吲哚丁酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，基部长出3~6条主根，主根长度均值达到4.5～6cm，最后将根系长度在3~6cm的组培苗进行炼苗与移栽。本发明培养方法简单，步骤易于操作，将北美红杉离体生根中壮苗的步骤提前到生根培养之前，有效的提高了组培苗移栽后的成活率，将生根培养基进行改良，能够加速北美红杉离体培养时的生根效率。