本发明提供了一种利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法。本发明采用黄檗无菌苗茎段为外植体，培养在MS+BA1.5mg/l+NAA0.5mg/l+葡萄糖20g/l+琼脂6.0g/l的培养基上，愈伤组织诱导率为100％，愈伤组织不定芽发生率可达75.4％，每个外植体平均再生不定芽数为14.7。将再生的不定芽继续在继代增殖培养基MS+BA0.5mg/l+蔗糖20g/l+琼脂6.0g/l上培养，一个月后增殖倍数平均为3.4。将再生苗在1/4MS+IBA0.8mg/l+蔗糖20g/l+琼脂6.0g/l的培养基上进行生根培养，不定根的发生频率为90.6％，平均再生的不定根数为4.3。对生长健壮的再生苗进行移栽，移栽成活率为100％。本发明中黄檗离体茎段不定芽发生的再生系统具有高频性和可重复性，培养周期短，为黄檗组织培养快速繁殖及利用基因工程改良黄檗打下了很好基础。