本发明提供了一种利用茎尖组织高效繁殖大花蕙兰种苗的方法，所述方法包括外植体的选取；侧芽消毒；原球茎诱导培养；原球茎增殖培养；原球茎分化培养和生根壮苗培养。本发明诱导阶段提高原球茎诱导率；增殖阶段降低原球茎变异率和玻璃化率；分化阶段降低芽变异率，生根壮苗阶段种苗生长发育更加健壮，新根缠结比率降低，根系更加分散与伸展，同时种苗变异率降低。