本发明涉及一种轮叶蒲桃离体培养和快速繁殖的方法，包括下述步骤：取轮叶蒲桃外植体经表面消毒、初代培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养获得再生试管苗，并进行栽种。本发明极大加快了轮叶蒲桃的繁殖速度，年繁殖系数为1：100000，成本由原来的每株500元，降低至每株2～3元，且不受季节限制，环境易控，适合全国各地，生产得到的轮叶蒲桃种苗品质高，一致性好。