层析柱制备及有机物分离实验中洗脱废液再生的实验方法涉及层析技术领域。在层析柱制备及有机物分离实验中产生的洗脱废液为含有甲醇和三氯甲烷及微量有机物的混合液，甲醇和三氯甲烷都是有毒化合物，处置不当会给周边环境都带来很大危害。层析柱制备及有机物分离实验中洗脱废液再生的实验方法，其特征在于：对于层析柱制备及有机物分离实验中产生的第一洗脱废液和的第二洗脱废液采用常压油浴蒸馏的方法再生。本发明具有如下有益效果：废液回收率>99.3%，社会效益显著；保障实验室的排水系统不受三氯甲烷这种有机溶剂溶蚀的损害；节省化学废弃物处置承担的费用；本发明的方法简单且经济，该装置所用仪器设备均是实验室现有的常规仪器。