本发明提供一种基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，取黄花倒睡莲植株为外植体，经过表面消毒、初代培养、一体化培养、炼苗、移栽，最终获得黄花倒睡莲组培苗。本发明提供了一种采用多节间茎段作为外植体，同时采用专项研究出的独立配方使其在一代的培养基中完成增殖、生根等过程，利用它们一体化的方法来培育出黄花倒睡莲组织培养苗。本方法提高繁殖系数的同时，保存了苗木的优质性来满足引种推广的需求；这种黄花倒睡莲组织培养技术能在较短的30-50d内，繁殖出大量具有保持母本优良品质的黄花倒睡莲植株。