本发明公开了铁皮石斛组培一步成苗批量化生产的方法，包括以下步骤：(1)原球茎的繁殖：选择优良铁皮石斛植株的顶芽或腋芽为外植体，外植体消毒后在MS+6-BA0.1～3.0mg/L+KT0.2～1.0mg/L+IAA0.1～1.0mg/L+NAA0.2～2.0mg/L+矮壮素0.01～0.5mg/L琼脂固体培养基上，诱导原球茎的同时分化出健壮芽；(2)一步成苗批量化生产：将步骤(1)获得的带芽原球茎直接转入MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IAA0.2～0.5mg/L+NAA0.1～2.0mg/L+矮壮素0.5～2.0mg/L的琼脂固体培养基上进行增殖、分化、壮苗和生根；(3)试管苗移栽。本发明提供了一种繁殖周期短、成本低的铁皮石斛高效低耗量的组织培养方法；非常适合工业化生产，而且达到产业化水平。