本发明涉及一种用黑莓组培苗叶片离体循环再生的方法。其特征在于：以黑莓试管苗的叶片为外植体，诱导形成愈伤组织，从愈伤组织诱导分化不定芽，对不定芽进行继代增殖、壮苗培养和生根诱导，最后进行炼苗移栽。此解决方案愈伤组织诱导率达100％，分化率达64.4％以上，不定芽的增殖倍数可达5.74，生根率最高可达100％，平均生根数3.61，移栽成活率达96.9％。本发明利用取材方便和材料丰富的组培苗的叶片为外植体，建立黑莓叶片离体再生体系，同时利用不同阶段形成的不定芽苗为母本，多方位获取叶片，从而形成黑莓叶片多重循环离体再生体系，成功解决了黑莓组培苗叶片再生难的问题。