本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及一种提高对叶百部组培苗生根率的方法，包括以下步骤：选择百部顶芽作为外植体，对外植体进行无菌处理；切茎尖，转入诱导培养基培养28-35d，得到无菌苗；将无菌苗切割为1.0～1.5cm的带芽切段接种于增殖培养基，诱导丛生芽，培养时间为18-25d，得到无菌芽；将无菌芽切成带芽茎段接种于生根培养基；得到生根苗后于常温下遮阴处炼苗处理，然后移栽到草炭或黄心土基质中。该方法培养的对叶百部组培苗的生根率可达95％；生根苗的成活率可达99％，且生根率稳定性好，有效解决了对叶百部组培苗难于生根和生根率低的难题，降低了生产成本。