本发明涉及一种用于兰州百合遗传转化和种球快繁的tTCL离体再生技术，外植体经消毒处理后，鳞片周围切去1mm并横切为厚1-2mm的弯月形切片，顶芽横切成3-4mm圆形切片，接种于BA/NAA比值较大的诱导培养基中，外植体均未经愈伤组织阶段而直接诱导形成小鳞茎，诱导培养4周后，提高培养基中BA和NAA的浓度，且降低BA/NAA比值，扩繁培养2代后，培养基中停止添加BA和NAA，且加倍蔗糖含量，将小鳞茎转入生根培养基中诱导生根。本发明以鳞片和顶芽为外植体，且采用tTCL的切割培养方式，诱导途径单一，出苗整齐一致，相比传统块状接种方式，在诱导时间上缩短4-5天，诱导系数提高14-17倍，是基因转化和种球快繁高效稳定的再生体系。