本发明公开了一种提高结球甘蓝离体再生效率的组织培养方法，先取再生诱导率高的外植体；用次氯酸钠进行灭菌；嫩叶在诱导培养基上先进行16-20h的暗培养，再进行光培养；带腋芽的嫩茎段在诱导培养基上直接进行光培养；将诱导出的芽或丛生芽，转接在增殖培养基上，进行继代增殖；取生长健壮的单芽进行生根培养；生根后在室温下去掉封口膜进行练苗，然后把根部培养基清洗掉后，移栽在准备好的穴盘里。本发明解决不同外植体消毒时间的问题，解决了在结球甘蓝离体再生诱导过程中再生系数低的问题。本发明从消毒时间，外植体取材部位、不同激素配比方面建立了结球甘蓝最为高效的再生体系，为结球甘蓝种质资源的保存和开展结球甘蓝基因工程育种奠定基础。