本发明提供一种应用通城虎叶片进行快速繁殖的方法，包括以下步骤：制备通城虎无菌外植体；愈伤组织诱导：将无菌外植体去掉叶脉并切块处理后接种到诱导培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织；愈伤组织分化：将所述愈伤组织接种到分化培养基中获得丛生芽；壮苗：将丛生芽接种到壮苗培养基中进行壮苗培养，获得试管苗；生根：将试管苗移植入生根培养基中获得带根的试管苗；炼苗和移栽：炼苗获得完整植株之后将其移栽至基质中培养。本发明采用叶片为外植体，不仅取材方便，而且节约了茎段避免了整株采集，有利于通城虎资源的保护，也能满足市场对通城虎药材的需求。