一种心叶小花苣苔两步成苗组培快速繁殖的方法，包括如下步骤：(1)以心叶小花苣苔叶片为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养中培养诱导出不定芽；(3)将不定芽置于MS基本培养基中，经继代增殖培养后获得大量丛生芽；(4)将丛生芽剪切成单芽置于添加不同生长素的MS基本培养基中进行培养，得到生根苗。利用本发明的方法，外植体消毒培养7d便开始长出不定芽，出芽率为86.9％，增殖系数为6.1，生根率为89.5％。本发明能在短期内提供大量优质种苗，对进一步保护和利用苦苣苔科植物资源、拯救物种具有十分重要的意义。