本发明公开了一种欧美杂种山杨的农杆菌介导转基因方法，包括如下步骤：（1）预培养：欧美杂种山杨在1/2MS培养基上继代繁殖得到组培苗；选取生长状态良好的组培苗上带有部分叶片的叶柄作为外植体，将外植体暗培养；（2）农杆菌的培养：携带双元载体pMP90、pBI121的农杆菌C58培养得到侵染液；（3）共培养与芽的诱导：将预培养后的外植体浸于侵染液中培养。本发明的方法从外植体选择、遗传转化条件优化等方面建立欧美杂种山杨高效遗传转化体系，本发明的方法遗传转化效率高。通过建立高效的欧美杂种山杨遗传转化体系，可在短时间内培育出杂种山杨抗逆新品种，对杨树抗性改良和抗逆新品种选育具有一定的理论和实际意义。