本发明公开了一种荷叶铁线蕨离体再生体系的建立方法，涉及荷叶铁线蕨（Adiantum reniforme var.sinense）通过植物组织培养技术以GGB途径再生的方法。本发明以荷叶铁线蕨的成熟孢子为外植体，经过外植体消毒、孢子萌发培养、增殖与分化等步骤建立了荷叶铁线蕨离体再生体系，对瀕危植物保护和缓解商业化生产需求具有重要意义。