本发明公开了一套提高根癌农杆菌介导的杨树遗传转化效率的方法。本发明所提供的根癌农杆菌介导的杨树遗传转化方法，包括M1)和M2)：M1)用含有目的DNA的重组根癌农杆菌转染杨树外植体得到转染外植体；M2)培养转染外植体得到外源基因稳定表达的杨树转基因植株；外植体的制备方法如下：将杨树组培苗的叶片从垂直主脉方向一分为二，得到近叶柄端半叶片和远叶柄端半叶片；将近叶柄端半叶片的叶边缘去除得到外植体。实验证明，本发明的根癌农杆菌介导的杨树遗传转化方法，适用于杨树以及其他木本植物的根癌农杆菌遗传转化，该方法重复性强，不受基因型限制，外源基因能够得到稳定表达，转化效率能够得到很大提高，转化效率能达到40％。