本发明涉及一种小秦艽组织培养离体快速繁殖方法，该方法包括以下步骤：⑴外植体的选择和消毒处理：取温室两年生小秦艽幼苗的茎尖为外植体，经浸泡灭菌、冲洗，即得消毒后的外植体茎尖；⑵外植体接种：将消毒后的外植体茎尖接种在愈伤组织诱导培养基上，形成愈伤组织；⑶愈伤组织增殖及分化培养：将愈伤组织接种到愈伤组织增殖及分化培养基上，形成小秦艽单芽；⑷生根诱导：将小秦艽单芽进行分株后转入生根培养基中培养，形成完整再生小苗；⑸育苗基质消毒；⑹植株移栽：将完整再生小苗直接移栽到消毒后的育苗基质中，炼苗后即长成正常小秦艽植株。本发明克服了小秦艽育苗周期过长、繁殖系数低的问题，易于操作、可进行工厂化快速育苗。