本发明公开了一种两性田菁胶助凝剂及其制备方法和应用方法，它所述的两性田菁胶助凝剂经过溶解、碱化、阴离子化、阳离子化和两性化一系列的工序制备得到，在应用时，所述的两性田菁胶助凝剂调配成浓度为10mg/L的溶液，且与浓度为200mg/L的聚合硫酸铁溶液混合成复配溶液，且控制复配溶液的PH值为7；本发明的两性田菁胶助凝剂是田菁胶经过阳离子化和阴离子化改性得到的，改善了其水溶性、提高了其与电解质的兼容性、增加了其粘度的稳定性；具有制备方法简单、操作方便、无毒性、助凝效果好、CODcr去除率高、污浊沉降速度快且浊度去除率高的优点，实践证明，其与聚合硫酸铁复配使用时，能大幅度的提高混凝效果，加快混凝沉降速度且矾花密实，CODcr去除率达到80%。