本发明公开了一种强化污泥厌氧发酵产酸的城市污泥预处理方法。该方法通过联合投加中性蛋白酶和乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-2Na)，并调节pH和反应温度，使污泥细胞破裂，有机物得到最大程度的释放和优质转化，显著提高了后续厌氧发酵所产有机酸量。试验结果表明，采用本发明的城市污泥预处理方法，污泥中的SCOD浓度提高了18.0-20.0倍，多糖浓度提高了11.0-13.0倍，蛋白质浓度提高了1.5-2.5倍；且此污泥预处理方法具有反应条件温和、效率高和污泥减量化程度深等特点。为最终实现剩余污泥的资源化、减量化和无害化，提供了一种新的方法和思路。