一种利用污泥水解液异养培养小球藻的方法，它涉及一种异养培养小球藻的方法。本发明要解决现有微藻生物柴油成本高的问题。本发明的方法：一、取生活污水处理厂的剩余污泥，超声处理；二、将污泥在转速为180r/min，温度为35℃的条件下，进行厌氧水解2~3d，调pH值至9.0，每12h进行氮气吹脱，得污泥水解液，加入除氮磷外的微量元素和其他营养元素，进行高压蒸汽灭菌，得培养液；四、按体积百分比10~20%接种小球藻，然后置于振荡培养箱中，进行培养150~180h，即完成小球藻的培养。本发明的方法能够节省小球藻的生产成本，为生物柴油的商业化生产提供廉价的原料。本发明应用于生物柴油制备领域。