本发明公开了一种棉针织物用酶助剂、制备方法及应用，属于棉针织物染整行业的前处理工艺配方技术领域。其特征在于，包括按重量百分比的下列组成：中性纤维素酶40-75%；除氧酶6-15%；保护剂7-30%；酶活促进剂8-20%。本发明的棉针织物用酶助剂，应用于棉针织物除氧抛光染色一浴法，可以有效使酶活保持稳定，从而使工艺步骤缩短，降低能耗，减少污水排放。