本发明涉及 一种 (S)-4- 氯 -3- 羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其以 4- 氯 -3- 羰基丁酸乙酯为底物，使该底物在生物催化剂和氢供体的存在下发生不对称还原反应生成 (S)-4- 氯 -3- 羟基丁酸乙酯，特别是，所述生物催化剂为酮还原酶 KRED102 ，所述氢供体为异丙醇，所述不对称还原反应在 pH 为 5.0~9.0 的水相缓冲液中进行，并且反应体系中添加有聚乙二醇 400 作为底物分散剂以及二价金属离子作为酶活力增强剂。 本发明方法通过添加廉价且来源广泛的辅料，有效地改进了传统酶催化生产过程中底物浓度低、酶反应耗时长等缺点，且 操作简单，特别适合 在制药工业中推广应用。