本发明公开了一种产维生素C合成中间体山梨酮的氧化葡萄糖酸杆菌工程菌及其构建方法和应用，属于遗传工程领域。本发明通过基因工程技术，将来源于普通生酮基古龙酸菌(Ketogulonigenium vulgare)的山梨糖脱氢酶基因(sdh)克隆到氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)中，获得了一株利用山梨醇生产山梨酮的G.oxydans工程菌。G.oxydans WSH-003是二步发酵法生产2-酮基-L-古龙酸(2-keto-L-gulonic acid，2-KLG)过程中第一步发酵工业菌株，由江苏江山制药有限公司提供。将sdh克隆到G.oxydans中，实现了从D-山梨醇到维生素C合成中间体山梨酮的转化，为进一步构建一步发酵工程菌生产维生素C直接前体2-KLG奠定了基础，山梨酮的产量可达72g/L，具有很好的应用前景。