本发明公开了一种人源抗TLR4抗体Fab及其制备方法及其应用，属于生物制药领域，涉及一种人源抗TLR4抗体Fab及其制备方法以及其在抑制TLR4介导的炎症反应中的用途。本发明从50例重症肝炎患者的全血中分离B淋巴细胞，扩增所有的抗体重、轻链可变区基因，采取基因工程方法，构建全人源Fab抗体库，用重组TLR4蛋白对噬菌体抗体库进行富集筛选分离抗TLR4的特异性人源Fab抗体，表达产物经ProteinL柱亲和纯化后，用于抗体的功能分析。体外试验结果表明，抗TLR4基因工程抗体Fab能够明显地阻断LPS诱导的人PBMC细胞对TNF-α的表达，抑制率达76.25%。