本发明涉及生物制药领域，具体讲，涉及一种重组人促红素的无血清培养基，其应用以及重组人促红素的制备方法。培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂中含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸、NaHCO₃和大豆蛋白水解液；还含有正丁酸钠、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、N-乙酰葡萄糖胺。本发明提高了CHO细胞在无血清培养阶段表达量、提高了提高CHO细胞在无血清培养阶段表达高活性EPO的比例、延长了细胞在无血清状态下存活的时间，提高了EPO的产量。