本发明公开了抗草鱼IgM的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用。所述抗草鱼IgM的单克隆抗体是由保藏编号为CCTCC？NO:？C2013193？的杂交瘤细胞株S467分泌产生的。利用所述的单克隆抗体构建了一种草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒中包括抗草鱼IgM的单克隆抗体的酶标记物，包被有抗原的酶标板。本发明所构建的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型ELISA检测试剂盒可以对草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性抗体的进行定性或定量检测，同时可以检测草鱼多份血清样品并达到早期诊断的目的，对草鱼出血病的诊断、流行病学调查和病原监测具有较高的临床使用及推广价值，为降低水产养殖过程中因草鱼出血病所带来的巨大经济损失提供了技术保障。